在日常的液相色譜(HPLC)分析中,色譜柱是實(shí)驗(yàn)室中最寶貴的“消耗品"。正確的清洗與保管方法,不僅能延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,還能幫助我們避免許多常見的分析問(wèn)題。今天,就讓我們一起來(lái)了解色譜柱的維護(hù)要點(diǎn)吧!
一、 為什么要清洗色譜柱?
1、避免柱效下降:緩沖液、離子對(duì)試劑、酸等成分容易殘留在柱內(nèi),若不清洗會(huì)加速柱子老化。
2、防止分析問(wèn)題:如壓力升高、峰形異常、鬼峰(Ghost peak)出現(xiàn)等,很多情況下都與柱內(nèi)雜質(zhì)沉積有關(guān)。
因此,當(dāng)使用可能導(dǎo)致柱劣化的流動(dòng)相時(shí),必須進(jìn)行清洗!
二、 日常使用時(shí)的清洗方法
1、使用相同成分且不含可能導(dǎo)致變質(zhì)的成分(緩沖液、離子對(duì)試劑、酸等)的流動(dòng)相清洗 15至30 分鐘。
2、如果長(zhǎng)期存放,請(qǐng)更換為出廠時(shí)使用的流動(dòng)相。
例如使用 甲醇/20 mmol/L 磷酸緩沖液 = 20/80 的條件時(shí),可以這樣操作:
1) 用 甲醇/水 = 20/80 清洗約 15 分鐘。
2) 若一周內(nèi)繼續(xù)使用,密封保存即可。
3、若一周以上不使用,需切換到出廠時(shí)的保存溶液(甲醇/水 = 70/30,再密封保存。
這樣做能確保柱子在下次使用時(shí)狀態(tài)穩(wěn)定。
三、 出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)的清洗方法
用可溶解任何吸附雜質(zhì)或沉淀樣品/鹽的溶劑清洗 30 至 60 分鐘。 請(qǐng)勿使用堿性溶液或強(qiáng)酸,因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)損壞色譜柱。
1、疏水性化合物吸附:
先用甲醇清洗 30 分鐘;若無(wú)改善,再嘗試更強(qiáng)的溶劑(如 THF、氯仿)。
2、鹽析出現(xiàn):
先用純水沖洗 30 分鐘;再用甲醇/水體系清洗 15 分鐘。
注意:避免使用強(qiáng)酸或堿性溶液,以免損傷色譜柱。
四、 色譜柱的保管方法
1、短期保管:用分析時(shí)的流動(dòng)相密封即可。
2、長(zhǎng)期保管:建議換成出廠保存液(如 ACN/水 = 70/30)后再密封保存。
關(guān)鍵點(diǎn):
1、使用有機(jī)溶劑濃度較高的條件保存,能有效防止微生物滋生。
2、每次停用前檢查是否需要清洗,避免因殘留緩沖液或酸性條件導(dǎo)致柱子損壞。
五、 總結(jié)
1、色譜柱是消耗品,但正確的清洗與保管能大幅延長(zhǎng)壽命。
2、色使用緩沖液、酸性流動(dòng)相時(shí),一定要進(jìn)行適當(dāng)清洗。
3、出現(xiàn)問(wèn)題時(shí),選擇合適的溶劑進(jìn)行針對(duì)性處理。
4、長(zhǎng)期保存時(shí),請(qǐng)使用推薦的出廠保存液。
讓我們一起養(yǎng)成良好的柱子維護(hù)習(xí)慣,讓每一次HPLC分析都更加順暢、高效!
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